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益創教你如何操作實驗室無菌環境以及如何監控

文章出處:www.chuabenhdongduoc.com 人氣:發表時間:2019-12-27 19:47

【導讀】微生物檢測人員需要每天在無菌室內工作,并在超凈工作臺或生物安全工作臺柜中操作。為了保證檢測的準確性,我們必須要求無菌室和臺面滿足要求。那我們應該如何驗證呢?讓我們介紹一下如何檢查環境中的無菌或滅菌效果。當使用

微生物檢測人員天天都需要在無菌室工作,在超凈臺或者生物安全柜里操作,為了保證我們檢測的準確性,我們必須要求無菌室以及工作臺符合要求,那我們應該怎樣進行驗證呢?下面我們介紹一下環境中無菌或殺菌效果應如何檢查。

一、紫外燈殺菌效果檢查

UV燈時,輻射強度將逐漸達到降低,這將影響其殺菌效果。因此,應該定期檢查。紫外線燈殺菌有效波長為253.7納米,其強度可用中心波長為254納米的紫外線強度計測定測量。生物替代可以不用紫外線強度計。

生物試驗的簡單步驟如下:選用枯草芽孢桿菌ATCC 9372制備濃度為106 CFU/毫升至108 CFU/毫升的細菌懸液;脫脂后的0.5厘米×1.0厘米布或鋁片在高壓滅菌后用作載體。將一滴制備好的細菌懸液滴在每個載體上,干燥備用;將8個細菌感染載體置于無菌容器中,置于紫外燈下方1m-1.5m處,打開紫外燈照射,分別在0.5h、1h、1.5h和2h取出2個細菌感染載體,分別加入含有5mL緩沖蛋白胨水的洗脫液;連續稀釋后進行平板計數。用相同的方法將八種細菌載體用作陽性對照,除了它們不暴露于紫外線和紫外線輻射之外,操作與試驗組相同。

殺滅率=(陽性對照中回收菌數-試驗組中回收菌數)/陽性對照中回收菌數×100%

殺滅率大于99.9%時,認為紫外燈殺菌效果合格。

二、無菌室空氣質量檢查

無菌室空氣質量檢查應根據取樣計劃進行,應使用適當的儀器收集空氣中的微生物,并根據空、靜、正常作業危險區域的情況使用測定監測危險區域的空氣微生物污染??諝庵形⑸锏牟蓸雍陀嫈捣椒ǘ喾N多樣,具體的采樣方法和采樣器根據多種采樣需求的目的而定。由于采樣器采集效率不同,應謹慎選擇合適的方法和設備。采樣器分為兩種類型:被動采樣器,如細菌滴盤;主動采樣器,如過濾采樣器、沖擊采樣器、沖擊采樣器等。被動空氣微生物采樣器如

1.沉降法

細菌滴盤不能測量空氣中微生物的總數,但可以測量空氣中微生物在表面上的沉降速率??諝庵形⑸锏臄盗靠梢源致杂嬎?,只要確定每單位時間細菌滴盤上的微生物數量,然后根據細菌滴盤的暴露面積和暴露時間之間的關系。

如果面積小于30m2,設置一條對角線取3點,中心取1點,兩端離墻1m處取1點。對于面積大于30m2的室內房間,應在離墻1米和中央的四面各放置一塊板,高度為實驗臺。將培養基平板暴露10分鐘,然后蓋上平板并倒置放置。培養48小時,并計算每個平板上的菌落數。

在日常監控期間,可以設置可接受的菌落計數限制。一般來說,無菌室內所有取樣盤上的細菌總數應少于15個。在空氣質量好的無菌室里,每個盤子里通常不會有超過兩種細菌生長。

2.空氣過濾法:

除自然沉降外,特殊的活性采樣器可用于空氣采樣。主動采樣器可以評估危險區域空氣微生物的特性。主動采樣器主要包括過濾采樣器、沖擊采樣器、沖擊采樣器等。

沖擊采樣器可分為狹縫采樣器、離心采樣器和針孔采樣器。狹縫式取樣器由額外的真空泵抽吸,收集的空氣通過取樣器的狹縫式板噴射并撞擊在緩慢旋轉的板狀培養基的表面上,并培養附著的活微生物顆粒以形成菌落并計數。由于內部風扇的高速旋轉,氣流從采樣器的前部被吸入,并從后部流出。在離心機的作用下,空氣中的活微生物顆粒有足夠的時間撞擊

在沒有空氣采樣器的情況下,您可以自行組裝空氣差錯率采樣裝置,如下圖所示,并注意組裝連接必須氣密。

打開圖中大瓶子的水龍頭,空氣將被泵入無菌水中。4L的水流出后,4L的空氣通過小瓶中的無菌水,即4L空氣中的微生物保留在50mL無菌水中。無菌吸取1毫升過濾后的水樣進行平板計數,并制作2個平行平板。37℃培養48h。

每升空氣中細菌的數量是:2個平板上細菌的平均數量×50/4。對

三、無菌室物體表面微生物污染檢查

表面微生物污染的檢查需要使用接觸器或拭子來獲得特定時間點特定表面上的微生物數量。

接觸器應與容器內已知面積的固體培養基接觸表面,接觸面積應大于20cm2,整個培養基應均勻用力壓在表面幾秒鐘而不移動。然后將裝置放回容器中,清潔取樣表面并去除殘留的營養物質。接觸器培養后出現的菌落可以給出原始表面微生物生存條件的鏡像“圖”。

使用棉簽更簡單、更靈活。用拭子擦拭一個表面,就可以計算出它擦拭的微生物數量。對于不能被接觸裝置接觸、不平或有凹陷的非吸收性大表面,拭子取樣特別方便。棉簽的操作方法如下:

準備材料:自制無菌棉簽或購買市售無菌棉簽、10厘米×10厘米內徑無菌標準板、無菌生理鹽水、培養基板。

如果樣品物體是平的,將無菌量規板放在物體表面,將浸泡過的無菌棉簽均勻涂抹在無菌量規板的中空部分,涂抹時旋轉棉簽,切斷棉簽與手的接觸部位,將棉簽放入一定體積的無菌生理鹽水中檢查。

敲擊采樣管80次以上,使棉簽上的細菌充分擴散,適當稀釋,進行平板計數,37℃培養48h計數。

細菌總數(CFU/cm2)=(平板上菌落的平均數量×稀釋因子)/取樣面積(cm2)

四、人員接觸面無菌檢查

人員與檢測物體之間的接觸面主要受以下因素影響。

被檢查人員洗手消毒后,五指并攏。將浸泡過的棉簽從柔順的手指根部到雙手的手指末端蘸兩次,邊搓邊旋轉棉簽。切斷操作者手的接觸部位,將棉簽放入具有一定體積的無菌室內生理鹽水中進行檢查。

按照“無菌室內物體表面細菌污染檢查”的方法進行樣品處理、接種、培養、計數和結果報告。

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